關(guān)于補骨脂平喘作用分析的論文
1材料與儀器
1.1動(dòng)物
SD大鼠，70只，SPF級，雌雄各半，180g左右，合格證號：0012625，由廣州中醫藥大學(xué)實(shí)驗動(dòng)物中心提供。
1.2試劑
卵白蛋白批號：970612上�；瘜W(xué)試劑公司；氫氧化鋁干粉批號：20020301-2廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)；滅活百日咳桿菌（100億個(gè)/ml）廣東省中醫院提供；大鼠IL-4（批號20060620）、IFN-γ（批號20060620）ELISA試劑盒由晶美生物工程有限公司提供；IL-5（批號20983008）ELISA試劑盒由BanderMedsystems提供。
1.3補骨脂不同溶劑提取物補骨脂95%乙醇提取物浸膏，濃度：3.45g藥材/ml（簡(jiǎn)稱(chēng)浸膏）；補骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物，濃度：10.0g藥材/ml（簡(jiǎn)稱(chēng)石油醚萃取物）；補骨脂95%乙醇提取醋酸乙酯萃取物，濃度：6.67g藥材/ml（簡(jiǎn)稱(chēng)醋酸乙酯萃取物）；補骨脂95%乙醇提取水萃取物，濃度：10.0g藥材/ml（水萃取物）；補骨脂水提取物，濃度：10.0g藥材/ml（簡(jiǎn)稱(chēng)水提取物）；補骨脂95%乙醇提甲醇洗脫物，濃度：2g藥材/ml（簡(jiǎn)稱(chēng)甲醇洗脫物），以上試劑均由廣州中醫藥大學(xué)中藥學(xué)院提供。
1.4儀器酶標儀BIO-RADSModel550，日本；CSW-Ⅰ型超聲霧化器汕頭光電研究所；10L玻璃干燥器。
2方法
2.1分組
將動(dòng)物隨機分成7組，10只/組：哮喘模型組（給水，1.0ml/100g）、浸膏組（藥材0.9g/100g）、石油醚萃取物組（藥材2.5g/100g）、醋酸乙酯萃取物組（藥材1.7g/100g）、水萃取物組（藥材2.5g/100g）、水提取物組（藥材10.0g/100g）、甲醇洗脫物組（藥材2.5g/100g）。以上各組動(dòng)物連續灌胃給藥治療10次，1次/d。末次治療后2h，各組動(dòng)物心臟采血5ml，1000r/min離心15min，血清分裝（1ml/管）保存于－70℃低溫冰箱內待測：IL-4，IFN-γ，IL-5（嚴格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)分別檢測）。
2.2卵蛋白哮喘大鼠模型的建立
2.2.1大鼠致敏
上述分組中每只動(dòng)物腹腔注射抗原液0.5ml/100g(含卵蛋白100mg、氫氧化鋁干粉100mg和2.5×109個(gè)百日咳桿菌/ml,制成懸濁液)［7］致敏第1次,次日每只大鼠再次腹腔注射0.5ml/只致敏液加強。
2.2.2激發(fā)和治療
首次致敏后第15天，于每天上午8～9時(shí)大鼠置于10L玻璃干燥器內超聲霧化吸入2%卵蛋白20min激發(fā)哮喘,連續14d。激發(fā)后第4天起，于每天激發(fā)后大鼠口服給相應試劑治療（見(jiàn)“2.1實(shí)驗分組”）。正常組以生理鹽水取代抗原液按0.5ml/100g腹腔注射致敏大鼠，第2天以0.5ml/只腹腔注射生理鹽水加強；首次致敏后第15天，每天上午8～9時(shí)該組大鼠超聲霧化吸入生理鹽水20min激發(fā)哮喘,連續14d。激發(fā)后第4天起，于每天激發(fā)后大鼠口服給蒸餾水治療。
2.3統計分析結果
采用四川大學(xué)黃志勇主編的（PEMS3.0）《中國醫學(xué)百科全書(shū)·醫學(xué)統計學(xué)》統計軟件包進(jìn)行統計：兩組均數比較t檢驗（方差齊）或t′（方差不齊）。
3結果
3.1補骨脂不同溶劑提取物對哮喘大鼠IL-5含量的影響結果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，大鼠服用補骨脂不同溶劑提取物后，血清IL-5含量呈下降趨勢，其中補骨脂浸膏、水萃取物、水提取和甲醇洗脫物各成分組大鼠血清IL-5含量降低明顯，與哮喘模型組比較P<0.05或P<0.01，差異有顯著(zhù)意義。而石油醚和醋酸乙酯萃取物兩成分組大鼠血清il-5含量降低不明顯，與哮喘模型組比較p>0.05，無(wú)顯著(zhù)性差異。
3.2補骨脂不同溶劑提取物對哮喘大鼠IL-4含量的影響結果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，大鼠服用補骨脂不同溶劑提取物后，血清IL-4含量呈升高趨勢，其中補骨脂浸膏、石油醚萃取物和水提取物各成分組大鼠血清IL-4含量升高明顯，與哮喘模型組比較P<0.05或P<0.01，差異有顯著(zhù)意義。而醋酸乙酯萃取物、水萃取物和甲醇洗脫物三成分組大鼠血清il-4含量升高不明顯，與哮喘模型組比較p>0.05，無(wú)顯著(zhù)性差異。
3.3補骨脂不同溶劑提取物對哮喘大鼠IFN-γ含量的影響結果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，大鼠服用補骨脂不同溶劑提取物后，不同溶劑成分大鼠血清IFN-γ含量升降不一致，其中補骨脂浸膏和石油醚萃取物兩成分組大鼠血清IFN-γ含量升高明顯，與哮喘模型組比較P<0.05，差異有顯著(zhù)意義。醋酸乙酯萃取物、水萃取物和甲醇洗脫物三成分組大鼠血清IFN-γ含量減低顯著(zhù)，與哮喘模型組比較P<0.05或P<0.01，有顯著(zhù)性差異，而補骨脂水提對ifn-γ含量未見(jiàn)明顯影響，與哮喘模型組比較p>0.05，無(wú)顯著(zhù)性差異。表1不同提取物對哮喘大鼠IL-5，IL-4，IFN-γ含量的影響(略)
3.4補骨脂不同溶劑提取物對哮喘大鼠Th1/Th2（IFN-γ/IL-5）的影響哮喘模型組、醇提浸膏組、石油醚萃取組、甲醇洗脫物組和水提取物組的Th1/Th2比值依次為（n=10)：0.5±0.2，1.1±0.5，0.9±0.5，0.8±0.4和1.2±0.5。提示，大鼠服用補骨脂醇提上述4種溶劑萃取物后，血清Th1/Th2比值呈增加明顯，與哮喘模型組比較P<0.05，差異有顯著(zhù)意義。而醋酸乙酯萃取物（0.4±0.2，n=10）和水萃取物（0.6±0.2，n=10）兩成分組大鼠血清Th1/Th2降低或增加不明顯，與哮喘模型組比較P＞0.05，無(wú)顯著(zhù)性差異。
4討論
哮喘與Th1細胞分泌的IFN-γ等細胞因子及Th2細胞產(chǎn)生的IL-4，IL-5等細胞因子含量和Th1/Th2比值密切相關(guān)。Th2的主要代表產(chǎn)物IL-4，能促進(jìn)B細胞產(chǎn)生IgE，引發(fā)炎癥介質(zhì)釋放的鏈式反應，促進(jìn)炎癥細胞的趨化聚集，引起呼吸道血管通透性增加和粘膜水腫，平滑肌痙攣及粘液分泌亢進(jìn)，是引起哮喘的重要因素。Th1的主要代表產(chǎn)物是IFN-γ，能抑制IL-4，IL-5等細胞因子的產(chǎn)生，進(jìn)而抑制IgE的產(chǎn)生和Eos活性，抑制IAR和LAR，是哮喘免疫調節中的一個(gè)重要的抑制因子，許多細胞因子通過(guò)它發(fā)揮生物效應［8］。因此，采用IFN-γ，IL-5，IL-4作為哮喘敏感指標進(jìn)行藥物篩選具有合理性。補骨脂是臨床上常用的補腎助陽(yáng)中藥，具平喘之功，臨床上常用于虛寒喘咳［9］。補骨脂是今后應加強研究和開(kāi)發(fā)的抗氣道抗炎癥中藥之一［2］。我院從20世紀80年代初使用補骨脂注射液治療支氣管哮喘取得了理想的療效，但其作用的物質(zhì)基礎并不清楚。因此，我們在前期研究的基礎上［2，3］，采用卵蛋白哮喘大鼠為模型，以體內血清IFN-γ/IL-4/IL-5含量變化為指標，初步篩選補骨脂平喘作用的有效部位。
從IFN-γ含量變化來(lái)看，補骨脂95%乙醇提取物浸膏和補骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物作用明顯，可能是補骨脂平喘的主要成分，但從抑制IL-5和IL-4含量分析，補骨脂95%乙醇提取水萃取物和補骨脂95%乙醇提甲醇洗脫物對Th2細胞產(chǎn)生的IL-4，IL-5細胞因子有較強的抑制作用，其他成分卻升高或對IL-5，IL-4沒(méi)有顯著(zhù)影響，而補骨脂水提取物對IFN-γ含量提高作用不明顯。另外，補骨脂95%醇提水萃取物顯著(zhù)降低IL-5和IFN-γ含量，同時(shí)在給藥的過(guò)程中我們發(fā)現水萃取物的毒性明顯強于其他成分，這與其腎毒性是否相關(guān)值得關(guān)注。根據以上分析，我們初步推測補骨脂平喘有效部位應該主要是醇提成分：補骨脂95%乙醇提取物浸膏，補骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物和甲醇洗脫物。
從哮喘中考察Th1/Th2的比值變化更具有意義［10］，因此我們以IFN-γ/IL-5為例，分析Th1/Th2的變化，探討補骨脂3個(gè)醇提成分（浸膏、石油醚萃取物和甲醇洗脫物）哪個(gè)為平喘的最佳有效部位。哮喘模型組、醇提浸膏組、石油醚萃取物組和甲醇洗脫物組的Th1/Th2依次為（n=10）：0.5±0.2，1.1±0.5，0.9±0.5和0.8±0.4，與哮喘組比較三者的P<0.05，差異有顯著(zhù)意義，但醇提浸膏的比值更大。因此結合前面的分析，我們認為三者的`平喘作用大小依次為：補骨脂95%乙醇提取物浸膏>補骨脂95%乙醇提甲醇洗脫物=補骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物。
【參考文獻】
�。�1］黃劍，趙陸華.補骨脂化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展［J］.藥學(xué)進(jìn)展，2000，24（4）：212.
�。�2］鐘南山.未來(lái)十年哮喘防治展望［J］.實(shí)用醫學(xué)雜志，2001，17（6）：471.
�。�3］譚慧淇．補骨脂注射液對支氣管哮喘平喘作用的動(dòng)物實(shí)驗和臨床觀(guān)察［J］.廣東醫學(xué)，1984，11：29.
�。�4］鄧時(shí)貴，李?lèi)?ài)群，歐潤妹，等.補骨脂總香豆素的平喘作用［J］.中國現代應用藥學(xué)雜志，2001，18（6）：439.
�。�5］鄧時(shí)貴，區勇全，李?lèi)?ài)群，等.補骨脂中黑色粘稠物鼻腔給藥的止喘作用［J］.西北藥學(xué)雜志，2000，15（5）：211.
�。�6］鄧時(shí)貴，李偉英，韓凌.總香豆素抗支氣管哮喘氣道變應性炎癥的作用機制［J］.中國新藥雜志，2006，15（9）：24.
�。�7］童舜華，吳敦序，陳淑俊，等.小青龍湯對哮喘大鼠氣道阻力、肺動(dòng)態(tài)順應性和血嗜酸細胞數的影響［J］.中國中醫藥科技，1999,6(2)：79.
�。�8］BarnesPJ.Effeckofnedocromilsodiumorplatet-activatingfactorinducedairwayresponses［J］.JAllergyClinImmunol,1993,92:187.
�。�9］柴瑞霽.溫腎助陽(yáng)化痰飲，攝納腎氣平喘咳-補骨脂治療虛寒喘咳的體會(huì )［J］.山西中醫，1997，13（4）：49.
�。�10］鄧時(shí)貴，韓凌，李偉英.總香豆素對卵蛋白致敏哮喘大鼠血清Th1/Th2的影響［J］.中國現代實(shí)用醫學(xué)雜志，2005，4(8)：1.
【補骨脂平喘作用分析的論文】相關(guān)文章：
論文分析同伴關(guān)系的中介作用06-12
地質(zhì)工程勘查作用分析論文03-15
現金流量的作用與分析論文06-11
分析游戲在體育教學(xué)中的作用論文06-27
萊菔子的藥理作用分析論文04-08
拓展訓練對大學(xué)體育教學(xué)作用分析論文06-14